generalitet
Immunfixation er en laboratorietest, der muliggør identifikation og typificering af gamma globuliner til stede i en biologisk prøve.
I detaljer giver analysen mulighed for at studere - i patientens blod eller urin - immunoglobulinklasserne (IgA, IgG, IgM, IgE eller IgD) og typen af lette kæde kappa eller lambda ifølge deres specifikke elektroforetiske mobilitet . For at identificere hvilket gammaglobulin der er involveret, involverer immunfiksationen derefter podning af specifikke antigener for fragmentet eller det tilsvarende antistof ( anti-immunoglobulin-antisera ): tilstedeværelsen af den formodede ændring bekræftes af dannelsen af bundfald, synlig for det blotte øje eller mikroskop.
Disse oplysninger er af stor betydning for især at fastslå diagnosen af plasmacellepatologier (gammopatier eller plasmacelldyscrasier). Immunfiksering er meget nyttig til evaluering og overvågning af multiple myelom, Waldenströms macroglobulinæmi og primær amyloidose (også kaldet amyloidose med let kæde).
hvad
Immunofixering (eller immunoelektroforese, også forkortet i akronym IFE ) er en teknik, der er i stand til at bestemme, om og hvilken klasse af immunoglobuliner (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) eller typen af lette kæde kappa eller lambda, er til stede i overskud eller defekt i patientens blodserum og urin.
Kappa- og lambda-lyskæderne karakteriserer den monoklonale komponent, dvs. antistofferne med samme identiske kemiske struktur.
Serum og Urin Immunfiksation: Hvornår er det angivet?
Plasmacellulære dysplasier eller gammopatier er en heterogen gruppe af lidelser med ukendt ætiologi kendetegnet ved:
- Disproportionel proliferation af en B-celleklon ;
- Tilstedeværelse i serum og / eller urin af en type immunoglobulin (eller dens polypeptidunderenhed), strukturelt og elektroforetisk homogen ( monoklonal ).
Normalt diagnosticeres plasmacelldyscrasier ved hjælp af elektroforese af serum- og urinproteiner efterfulgt af serumimmunfiksering (IFE).
Samtidig kan en blodprøve foreskrives til måling af den samlede koncentration af immunglobuliner (IgG + IgM + IgA).
At lære mere: Immunoglobuliner - hvad de er, hvordan de måles og referenceværdier »Immunfiksation: grundprincip
Immunfixering er en undersøgelse, der involverer to faser (først elektroforese i agarosegel, derefter immunudfældningen med specifik antisera ).
Det første trin med immunfiksering er det samme som for ELECTROPHORESIS af proteiner (eller protidogramma), derfor er det nødvendigt at huske noget koncept:
- Elektroforese er en laboratorieanalyse, der gør det muligt at bestemme mængden af proteiner, der er til stede i blodserumet eller i andre biologiske prøver, og for hver fraktion afslører, om der er uregelmæssigheder med hensyn til kvalitet. Denne prøve muliggør især adskillelsen af proteiner i fem grupper: albumin, alfa 1 globulin, alfa 2 globulin, beta globulin og gamma globulin ; sidstnævnte undersøges mere specifikt med immunfiksering.
- Elektroforese er en separationsmetode baseret på den forskellige migrationshastighed for elektrisk ladede partikler gennem en opløsning og et inert understøtningsmedium under påvirkning af et elektrisk felt dannet af en likestrøm. I praksis udnytter prøven den elektriske ladning og molekylmassen af de proteiner, der er til stede i patientens prøve. Under impulsen af et elektrisk felt migrerer disse makromolekyler og "grupperer" efter type, hvilket reagerer på stress på en karakteristisk måde. Resultatet ( elektroforetisk sporing ) består af forskellige toppe og kurver, hvortil proteinfraktionerne svarer. Normalt er den første top, højere og smalere, den for albumin ; at følge, vi observerer globulin toppe, meget lavere end albumin. Forøgelsen eller faldet i amplitude og intensitet af de toppe, der danner i stien, indikerer en større eller mindre forekomst af proteiner i hver kategori; jo flere proteiner er til stede i et bånd, jo højere er den respektive top. I tilfælde af gamma globuliner, hvis man ønsker at kende mængden af hver af de forskellige klasser (IgA, IgM, IgG etc.), vil det være nødvendigt at ty til single dosering. Generelt er de flere gamma globuliner til stede i et bånd, jo højere er den respektive top; højden svarer til den samlede mængde proteiner, der tilhører en bestemt kategori.
IMMUNOFISSATION giver:
1) Agarosegelelektroforese : patientens prøve (serum eller urin) deponeres på en elektroforetisk strimmel, dvs. understøttelsen til migration (sædvanligvis agarosegel). Ved anvendelse af et elektrisk felt, der genereres af en likestrøm, opnås adskillelse i forskellige bånd. I praksis migrerer hver type gamma globulin i blandingen (dvs. i patientprøven) baseret på molekylmasse og elladning. Den forskellige elektroforetiske mobilitet af gamma globuliner gør det muligt at identificere dem (hver af dem falder sammen med et specifikt band i den elektroforetiske vej) og observere eventuelle uregelmæssigheder.
2) Immunpræcipitation med specifik antisera (Fixation) : specifikke antigener til et specifikt antistof eller fragment tilsættes individuelt til hver elektroforetisk strimmel (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-light kappa eller anti-kæde) lambda light chain). Hvis et monoklonalt protein er til stede, vil interaktionen af antigenet med det tilsvarende antistof producere et smalt bånd (dette betyder, at resultatet er positivt) og dannelsen af et bundfald, der er synligt for det blotte øje eller mikroskop. Til sidst behandles prøven (dvs. vaskes og farves) for at fjerne proteiner, der ikke har udfældet, for at opnå tørringen af gelen og fortsætte med aflæsningen af resultaterne.
Hvorfor det kører
Hvad er immunofixation til?
Serumimmunfiksering er en undersøgelse, der er angivet til diagnosticering eller overvågning af sygdomme præget af en ændring af gammaglobuliner, især når det drejer sig om produktion af monoklonal komponent ( monoklonal gammopati ).
At lære mere: Monoklonale Gammopatier - Hvad og hvilke er »Immunforbindelser er nyttige i tilfælde af mistænkt plasmacelldyscrasi og er grundlæggende for undersøgelsen af MIELOMA (og beslægtede patologier) og MGUS (et akronym for "monoklonale gammopatier af usikker betydning").
Denne test giver os også mulighed for at evaluere Waldenströms makroglobulinæmi og letkædet amyloidose ( AL ).
Immunofixation: Hvornår er undersøgelsen foreskrevet?
Indikationen for immunfiksering følger efter klinisk eller laboratoriebevis, der rejser mistanke om ændringer af monoklonale antistoffer eller immunoglobuliner i serum eller urin.
Eksempelvis tillader denne prøve at uddybe resultatet af seroprotektiv eller urinelektroforese: når de elektroforetiske sporinger afviger båndene, der svarer til gamma-globulinerne fra normalitet, identificerer immunfiksationen hvilke af disse proteiner der ændres, hvad angår kvantitet og kvalitet.
Sammenfattende kan serumimmunfiksering foreskrives:
- I tilfælde, hvor andre laboratorieprøver giver et unormalt resultat, hvad angår fravær eller mindre og større mængde plasmaproteiner i forhold til normen;
- Når tilstedeværelsen af sygdomme karakteriseret ved fremstillingen af en monoklonal komponent mistænkes, såsom:
- Multipelt myelom og dets varianter;
- Waldenströms makroglobulinæmi;
- amyloidose;
- Når patienten udvikler symptomer og tegn, der tyder på forekomst af en monoklonal gammopati eller multiple myelom, såsom:
- Knogler;
- Anæmi;
- Let træthed;
- Tilbagevendende infektioner;
- Uforklarede brud.
I tilfælde af multiple myelom er elektroforese af proteiner og immunfiksering af stor nytte også til overvågning af sygdommens fremskridt (opfølgning).
Immunfixation: hvorpå prøver kan udføres?
De biologiske prøver, der kan udsættes for immunfiksering er hovedsageligt:
- Serum (serumimmunfiksering);
- Urin (urinimmunfiksering);
- Spiritus * (væskeimmunfiksering).
* Bemærk : CSF eller cerebrospinalvæske er væsken, der gennemsyrer og beskytter hjernen, rygmarven, kraniale nerver og rygrunder.
Normale værdier
Et negativt resultat af serum- og urinimmunfiksering til monoklonale eller polyklonale gamma globuliner betragtes som NORMAL .
Gamma globuliner
Gamma globuliner udgør 9-20% af de samlede plasmaproteiner.
- Referenceværdi Gamma globulin : 0, 9-1, 4 g / dl
Med hensyn til den totale koncentration af immunoglobuliner ( IgG + IgM + IgA ) antages det, at værdier mellem 600 og 2300 mg / dl er normale.
- Referenceværdi Immunogobuliner i serum :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Bemærk : Eksamens referenceinterval kan variere lidt afhængigt af alder, køn og instrumentation, der anvendes i analyselaboratoriet. Af denne grund er det bedst at høre de intervaller, der er angivet direkte på rapporten. Det skal også huskes, at resultaterne af analyserne skal vurderes som helhed af den praktiserende læge, som kender patientens medicinske historie.
Høje værdier - årsager
Forøgelsen i gamma globuliner kan være:
- Polyklonale, hvis produktionen af immunglobuliner er heterogen, det vil sige, at alle komponenter i gamma globulinerne - produceret eller hidrørende fra forskellige plasmaceller - påvirkes af stigningen;
- Monoklonale, når gamma-globulinerne produceres eller afledes fra en enkelt type (klon) af plasmaceller.
Forøgelsen af polyklonale gamma globuliner kan være forbundet med:
- Kroniske inflammatoriske sygdomme;
- Reumatoid arthritis
- Systemisk lupus erythematosus;
- Kroniske leversygdomme (såsom hepatitis og cirrose);
- Akutte og kroniske infektioner;
- Nylige immuniseringer;
- Nogle tumorsygdomme.
Høje værdier af monoklonale gamma globuliner kan i stedet angive tilstedeværelsen af:
- Nogle neoplasmer og kroniske betændelser;
- Multipelt myelom;
- lymfom;
- Waldenströms makroglobulinæmi.
Et overskud af gammaglobulin kaldes hypergammaglobulinæmi, mens en mangel er kendt som hypogammaglobulinæmi .
Lavtværdier - Årsager
Reduktionen af gamma globuliner kan indikere tilstedeværelsen af forskellige sygdomme i immunsystemet på genetisk basis, herunder agammaglobulinæmi eller en sekundær immundefekt (fx AIDS, nyresvigt, akut sepsis og Cushings syndrom).
Faldet i gamma globulin værdier kan også afhænge af brugen af cytostatiske lægemidler, immunosuppressiva og steroider.
Hvordan det udføres
Serumimmunfiksering
Serumimmunfiksering involverer en simpel blodtegning fra venens ven. Serumet opnås ved centrifugering af den biologiske prøve; dette gør det faktisk muligt at adskille fraktionen indeholdende cellerne (corpuskulær del) fra den flydende en af blodet (plasma). Blodserumet er fri for koagulationsfaktorer (fibrinogen, faktor VIII, faktor V og prothrombin).
Urinær immunforbindelse
For at udføre urinimmunfiksering er det nødvendigt at samle en lille mængde urin i en speciel steril beholder. Baseret på doktorens og laboratorieindikationerne kan prøven opsamles uden en præcis timing ( tilfældig ) eller inden for 24 timer .
Immunfixering af spiritus
Analysen kræver, at der tages en lille mængde cerebrospinalvæske gennem indsættelse af en nål inde i ryghulen ( lumbal punktering ).
forberedelse
Immunofixation: Hvordan forbereder du dig til eksamen?
- Forud for blodprøveudtagning kan nogle laboratorier kræve, at du observerer en hurtig på mindst 10-12 timer. I løbet af denne tid er en lille mængde vand tilladt.
- Immunfixering kan udføres på urin indsamlet på et bestemt tidspunkt af dagen (tilfældigt) eller i løbet af 24 timer, så det er nødvendigt at opnå de passende sterile beholdere på forhånd.
- Hvad angår immunforbindelsen af væsken er der i stedet ingen særlig forberedelse nødvendig.
Hvad kan ændre resultatet af eksamen?
Nogle lægemidler kan påvirke udfaldet af immunfiksering, så det er tilrådeligt at indberette eventuelle igangværende lægemiddelbehandlinger til lægen.
I seks måneder før undersøgelsen kan administrationen af vacciner (immunisering) og brugen af stoffer, såsom phenytoin, procainamid, orale præventionsmidler, methadon og terapeutisk gamma globulin, øge koncentrationen af immunglobuliner. Andre lægemidler, der kan ændre testresultatet, er corticosteroider, neomycin, acetylsalicylsyre og chlorpromazin.
Fortolkning af resultater
Resultatet af immunfiksationen vurderes i kombination med resultatet af andre analyser. Fortolkningen af fundet er ansvaret hos den praktiserende læge eller referencespecialisten, som kan identificere og sammenligne de ændringer, der påvirker en bestemt gamma-globulin (for eksempel båndet, som falder sammen med immunoglobulinerne G) til visse sygdomme. Denne evaluering bekræfter eller støtter den diagnostiske hypotese: Generelt kan immunfixering afsløre en normal gamma-globulinprofil eller identificere et monoklonalt protein eller en polyklonal model .
Når sygdommen er defineret, kan immunfixering udføres for:
- Overvåg sygdommen over tid, følg derefter kurset (opfølgning);
- Kontroller effektiviteten af den terapeutiske protokol .
Fordele og ulemper ved immunofixation
Sammenlignet med proteinelektroforese, immunfiksering:
- Det er hurtigere : Resultaterne af immuniseringen opnås normalt inden for tre timer;
- Det er mere følsomt (omend lidt): immunfixering kan afsløre et immunoglobulin, der er udelukket fra proteinelektroforese, især i lave koncentrationer (mindre end 1 gram / liter).
Endvidere er immunfiksationen:
- Det kan delvist automatiseres ;
- Det er let læseligt og fortolkeligt .
Imidlertid er immunfiksering dyrere end proteinelektroforese og tillader kun gamma-globulinanalyse .
Normalt resultat
Ved immunfiksering indbefatter en normal bane:
- Et band der falder sammen med det mørkere immunoglobulin G ( IgG );
- Et band svarende til det letteste immunoglobulin A ( IgA );
- Fraværet af båndet til immunoglobulin M ( IgM );
- Kappa bandet er tættere end lambda (let kæde), med et forhold på 2: 1.
I et normalt resultat er båndene store, og der er en gradvis og ensartet reduktion i farvedensiteten mod kanterne af immunoelektroforesebåndet.
Polyklonale gamma globuliner
I nogle tilfælde er alle immunfixationsbåndene jævnt dækket i samme grad. Denne model repræsenterer tilstedeværelsen af polyklonale immunoglobuliner . Også i dette tilfælde er båndene brede, og overgangen til kanterne af den immunoelektroforetiske strimmel er gradvis. IgM-bandet - normalt fraværende - er bredt.
Monoklonale gamma-globiner
Når et smalt bånd med skarpe kanter kan identificeres i immunforbindelsesruten, betyder det, at søgningen efter monoklonale komponenter er positiv .
Identifikationen af et monoklonalt immunoglobulin er nyttigt ved diagnosen af de følgende betingelser:
- Monoklonal gammopati af ubestemt betydning (MGUS);
- Multipelt myelom;
- Waldenstroms makroglobulinæmi;
- Amyloidose.
Endvidere kan immunfixering anvendes til overvågning af terapi i plasmacelldyscrasier (dvs. multiple myelom og Waldenstroms macroglobulinæmi). Hvis niveauet af monoklonalt protein falder eller ikke kan påvises efter kemoterapi, kan det indikere et respons på behandlingen . I modsætning hertil er et monoklonalt protein, der vedvarer på trods af behandling, et tegn på ildfast sygdom .
Bemærk venligst . Et negativt immunfiksationsresultat udelukker ikke altid en plasmacelldyscrasi. For eksempel kan et ikke-sekretorisk multipelt myelom eller oligosecretory give negative resultater både i urin og i serum. Hvis den diagnostiske mistanke om gammopati stadig er høj, er bestemmelsen af forholdet mellem Kappa / Lambda Libere Light Chains ( K / L-forholdet ) indikeret.
Immunfiksering og diagnose af multipel sklerose
Immunfiksering af cerebrospinalvæske (væske) ordineres, når lægen mistænker forekomsten af multipel sklerose . I dette tilfælde er den vej, der bestemmes karakteristisk, da den fremhæver tilstedeværelsen af de såkaldte oligoklonale bånd . Resultatet er rapporteret i laboratorierapporten som positiv . Det bør overvejes, at båndene normalt ikke observeres i serumimmunfiksering, da de korrelerer med produktionen af intratekale gammaglobuliner .
Det skal imidlertid bemærkes, at dette fund ikke nødvendigvis bekræfter diagnosen, da andre betingelser kan forekomme med oligoklonale bånd i cerebrospinalvæsken.
Med andre ord er identifikationen af oligoklonale bånd med væskeimmunfiksering meget nyttig til støtte for diagnosen multiple sclerose, men skal bekræftes ved andre undersøgelser . Andre tilstande, der kan give dette resultat, er inflammationer i centralnervesystemet, herunder: HIV-relateret encephalitis, neurosyphilis, neurosarcoidose, Lyme meningoencefalitis, CNS-maligniteter, optisk neuromyelitis og tværgående myelitis.
