Essay ABTS
Det er en analytisk metode, der bruger en spektrofotometrisk måling til at bestemme antioxidantkapaciteten i en prøve. Ved anvendelse af et UV-Vis-spektrofotometer måles absorbansen af en opløsning indeholdende det radikale ABTS • +, som er dannet ved oxidation af ABST (2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonat), et farveløst stof i form radikaler farves ved at absorbere ved bølgelængdeegenskaber i det synlige område. Tilsætningen til opløsningen af ABTS • + af antioxidantmolekyler, der kan virke ved at overføre både hydrogen og en elektron, bestemmer reduktionen af radikalet til den farveløse form, med efterfølgende misfarvning af reaktionsblandingen. Denne blegning, der er proportional med mængden af antioxidant, der er til stede, kan måles som et fald i absorbans over en bestemt tid ved en specifik bølgelængde (734 nm). Antioxidantkraften udtrykkes ved sammenligning med absorbansværdierne målt for kendte mængder af et antioxidantmolekyle valgt som referencestandard, hvilket normalt er ascorbinsyre eller trolox (i dette tilfælde vi taler om TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity antioxidant aktivitet.
Antioxidant-effektmåling baseret på brug af ABTS har fordelen ved at være enkel og hurtig. Desuden tillader det måling af antioxidantstoffer både hydrofile og lipofile i et bredt pH-interval. Det skal dog tages i betragtning, at den anvendte radikal (ABTS • +) ikke er fysiologisk og ikke er til stede i biologiske systemer, og at problemer med gentagelsen af måling som følge af reaktionskinetikken hos de forskellige involverede antioxidanter ofte fremhæves.
FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
FRAP-testen måler antioxidanternes reducerende evne mod jernioner. Det er en metode baseret på elektronoverførsel, hvor jernioner passerer fra Fe3 + til Fe2 +. Under bestemte betingelser af pH (3.6) og i nærvær af TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazin) danner disse ioner komplekser med forskellige karakteristika, især det reducerede derivat (Fe2 + -TPTZ) antager en blå farve, der har en maksimal absorption ved 593 nm, som kan måles spektrofotometrisk. Reduktionskapaciteten af et antioxidantstof kan derfor måles som en ændring i absorbansen af opløsningen indeholdende oxidanten ved bølgelængden etableret ved sammenligning med variationen i forhold til en standard (f.eks. Ascorbinsyre).
FRAP-testen blev designet til at måle plasmaets reducerende effekt, men blev derefter tilpasset til at teste antioxidantkapaciteten af rene forbindelser og komplekse matricer. Faktisk, da denne metode gør det muligt at evaluere kun reduktionskapaciteten ved elektronoverførsel, fuldstændig at ignorere virkningen af antioxidanter, som virker gennem hydrogenoverførsel, tillader det ikke at måle molekylers bidrag, såsom thioler og proteiner, som spiller en antioxidantrolle grundlæggende i biologiske væsker (fx blod). Fordelen ved at anvende denne metode er, at den er en af de enkleste, hurtigste og billigste metoder til bestemmelse af antioxidantkapaciteten in vitro.
DPPH TEST
2, 2-diphenyl-1-picrilhydrazyl (DPPH •) er et meget stabilt og kommercielt tilgængeligt nitrogenradikal, der er kendetegnet ved en intens lilla-rød farve, som duller, når den reduceres i nærværelse af et molekyle med antioxidantkapacitet. Ved spektrofotometrisk måling ved 517 nm af ændringen i absorbansen af DPPH-opløsningen efter reaktion med en antioxidantforbindelse er det muligt at kvantificere teststoffets reducerende kapacitet, uanset om den virker med hydrogenoverførsel eller elektronoverførsel. Resultatet udtrykkes generelt som IC50, dvs. mængden af antioxidant, der er i stand til at reducere den oprindelige DPPH-koncentration med 50%.
Dette er en hurtig, enkel og billig metode. Grænserne for denne analytiske teknik er givet ved muligheden for, at resultaterne af analysen forvrides i det tilfælde, hvor de undersøgte molekyler i samme bølgelængdeområde af DPPH-radikalet eller i nærvær af store molekyler huddles sterisk, som ikke de kommer til at reagere med den reaktive del af radikalet. Dette får DPPH'en til at reagere med antioxidanter op til 1000 gange langsommere end peroxylradikaler.
PCL TEST (Photochemiluminescence)
PCL-testen er baseret på reaktionen af en specifik radikalart, superoxidanionet (O2 • -), dannet fotokemisk ved UV-stråling, med en forbindelse, der er i stand til at udstede kemiluminescens. Den anvendte markør er luminol, et molekyle, der, når det oxideres af frie radikaler, udsender et lys, der kan måles ved hjælp af et specielt instrument (Photochem®). Tilstedeværelsen af antioxidantstoffer i rationblandingen deaktiverer de radikale arter, som hæmmer udledningen af kemiluminescens. PCL analyse er meget hurtig og følsom. Ved anvendelse af to forskellige analytiske protokoller, kaldet ACW (Antioxidant Kapacitet Vandopløselig) og ACL (Antioxidant Kapacitet Lipidopløselig), kan bidragene til den totale antioxidantkapacitet af den vandopløselige komponent (flavonoider, E-vitamin) måles for den samme forbindelse. C, aminosyrer osv.) End den liposløselige en (tocopheroler, tocotrienoler, carotenoider osv.). Antioxidantkapaciteten af den undersøgte vare opnås ved at sammenligne de værdier, der er registreret med målingerne vedrørende standardreferencemolekyler, ascorbinsyre for ACL-protokollen og Trolox for ACW-protokollen.
